由于高效液相色譜具有速度快、分離效果好、靈敏度高等優(yōu)點,因此應用越來越廣泛。HPLC色譜柱是HPLC系統(tǒng)的重要組成部分。使用時需謹慎使用,使用后必須進行保養(yǎng),以免下次使用出現(xiàn)問題。色譜柱的頻繁更換是非常昂貴的,因此為了節(jié)約成本,需要更大程度的延長色譜柱的使用壽命。同時,必須小心維護色譜柱,以保持每次獲得結(jié)果時的準確性和一致性。深圳恒譜生總結(jié)了7個關(guān)于色譜柱的誤區(qū),希望能延長使用壽命。
誤區(qū)一:HPLC色譜柱不能反吹
一般情況下,液相色譜柱的設(shè)計耐壓值遠高于ZUI大工作壓力。更換柱子時,反吹可以清除柱頭一些吸附性強的物質(zhì),我們把這些殘留的物質(zhì)沖掉,防止壓力升高。但是如果你買的色譜柱在柱頭使用大粒徑填料,反吹時這部分填料會被沖掉。因此,在選擇是否反吹之前,您必須檢查您使用的液相色譜柱。
誤區(qū)二:所有C18列都一樣
在早期的HPLC系統(tǒng)中,C18是標準反相色譜的鍵合固定相,因此C18被用作反相色譜柱的標準。然而,時代不會停滯不前。人們對科學的追求和認識越來越深刻,出現(xiàn)了更多的固定相,許多C18色譜柱也誕生了。雖然也使用硅膠作為基質(zhì),但各有其特定的填料鍵合合成工藝,因此色譜性能不同。所以僅僅因為名稱都是C18列,認為性能是一樣的是錯誤的。
誤區(qū)三:空氣一旦進入HPLC色譜柱就會損壞
我們都知道,當色譜柱沒有連接到色譜儀時,要保證色譜柱密封嚴密。但在實際應用中,即使有少量空氣進入色譜柱末端,也不是什么大問題。色譜柱與色譜儀連接使用時,在系統(tǒng)初始加壓過程中,空氣會在短時間內(nèi)被溶劑擠出。因此,不要僅僅因為少量空氣進入色譜柱就認為色譜柱已損壞。
誤區(qū)四:不需要保護柱
事實上,使用保護柱有很多優(yōu)點。高效液相色譜的流動相中常使用各種試劑,其中混有一些不溶或不純的物質(zhì)。大多數(shù)不溶物可以通過用篩子或膜過濾器過濾流動相來去除,但不能*過濾非常細的顆粒。另外,流動相調(diào)制后,不溶、不純的物質(zhì)有可能通過空氣、容器、人體等落下,這些不溶、不純的物質(zhì)會污染色譜柱、堵塞色譜柱,或?qū)ιV柱產(chǎn)生不佳影響。對分析的影響。
此時,通過在色譜柱前安裝分析保護柱,可以防止其產(chǎn)生,保護色譜柱。與更換昂貴的分析柱相比,添加或更換保護柱只需很少的費用。液相色譜保護柱幾乎沒有死體積,更換方便。適用于UHPLC系統(tǒng)的高壓,截留那些強保留且不可吸附的化合物。樣品和流動相的過濾可以保持保護柱對化學污染物的吸附能力,更長時間地保持柱效,延長色譜柱的使用壽命。
誤區(qū)五:反相色譜柱不能使用純水相
當使用低有機溶劑含量或純水作為反相色譜柱的流動相時,一些色譜工作者會遇到相塌陷。因此,有人認為反相色譜柱不能使用純水。但實際上,市面上銷售的反相色譜柱(如極性包埋柱和極性封蓋柱)都是親水性的,其表面特性允許使用純水,不會造成塌陷或保留時間偏移。
誤區(qū)六:粒徑越小,柱填料壓力越高,分離效果越好
色譜柱的性能不能僅僅通過填料是否超小粒徑和超高柱壓來評價?,F(xiàn)代對色譜柱柱特性的研究越來越深入,已經(jīng)開發(fā)出一些提高色譜柱效率的方法。例如,新型表面多孔材料色譜柱的柱效與亞2?mUHPLC色譜柱一樣好。與傳統(tǒng)色譜柱相比,它的柱壓非常低。
誤區(qū)七:柱壓不會影響色譜分離效果
近年來,HPLC色譜柱柱壓問題引起了眾多色譜工作者的關(guān)注。色譜圖的很多參數(shù)受柱壓影響,包括一些溶質(zhì)的摩爾體積、滯留體積、柱孔隙率、保留因子和流動相等。如果在13.789MP的壓力下操作色譜柱,即使保留時間差異很小。但是,當柱壓接近2000psi(13.789MPa)時,柱壓的影響可能比較明顯。