c18色譜柱的柱效能是評價色譜性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)，混合物能否在色譜柱中得到分離，除取決于選擇合適的固定相外，還與色譜操作條件及色譜柱的裝填狀況等因素有關(guān)。

　　高效液相色譜柱的正確使用包含：加裝保護(hù)柱，過濾流動相和樣品，凈化樣品，避免過高的柱壓，注意溫度和酸堿度，正確及時的沖洗等。

　　1、加裝保護(hù)柱

　　保護(hù)柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學(xué)“拉圾”同時也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口、進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1、2μm等不同孔徑的濾器，但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污然，因此，加裝保護(hù)柱是必要的，特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時更是保護(hù)分析柱不可少的措施。

　　保護(hù)柱填料應(yīng)與分析柱一致，粒徑可較分析柱大。保護(hù)柱屬消耗品，經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析(50～100次)后，出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時，應(yīng)考慮更換保護(hù)柱。

　　2、過濾流動相和樣品

　　流動相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成，原則上，所有經(jīng)過色譜柱的流動相均應(yīng)過濾，但在實(shí)際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別:當(dāng)有機(jī)溶劑用色譜純級，水用石英亞沸水或其它超純水時，在能確保水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時，過濾并無更多實(shí)際意義。

　　當(dāng)流動相中含有緩沖鹽時，則過濾是必要的，如前所述，當(dāng)緩沖溶液放置一段時間(視環(huán)境溫度不同而異，夏季一般不超過48 h，冬季一般不超過一周)后，在使用前還應(yīng)重新過濾。

　　所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng)0. 45μm ( 0. 22μm則更好)孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系，二者不可混用，以防止濾膜溶解而造成污染。

　　裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換，以避免濾器因過載而起不到過濾作用。

　　3、凈化樣品

　　當(dāng)樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分，如產(chǎn)生吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì)，以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。

　　4、避免過高的柱壓

　　雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達(dá)6000 p si (磅/平方英寸) ，但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命，避免的方法是

　　(1)柱壓過高時，盡可能采用較小的流速，以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。

　　(2)當(dāng)流速較大時，應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。

　　(3)使用手動進(jìn)樣閥時，進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會很快使柱報(bào)廢。當(dāng)使用多柱聯(lián)用時，柱切換要避免在高壓下進(jìn)行。

　　5、注意溫度和酸堿度

　　一般以硅膠為基質(zhì)的c18色譜柱最高使用溫度不超過60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動相pH接近使用限度時，更應(yīng)降低使用溫度。

　　溫度過高會加快鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而使填料性質(zhì)改變，柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。

　　目前的鍵合硅膠色譜柱標(biāo)示的pH適用范圍可達(dá)2～10，但在實(shí)際使用時應(yīng)避免pH條件，特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用 ，如必須要在pH條件下使用時，可通過以下方法避免柱損害:

　　(1)在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱(飽和柱)來飽和流動相

　　(2)降低使用溫度

　　(3)檢驗(yàn)完畢后立即用與所使用的流動相互相混溶的“溫和溶劑”*清洗。

　　6、正確及時的沖洗

　　開始試驗(yàn)前，應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對于新c18色譜柱，如無特殊說明均為評價報(bào)告中所用流動相。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶，如不能混溶，要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。