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色譜法是一種分離混合物中各組分的分析技術(shù)。色譜柱是色譜中使用的儀器的一部分。使用柱的五種色譜方法是氣相色譜(GC),液相色譜(LC),離子交換色譜(IEC),尺寸排阻色譜(SEC)和手性色譜。色譜的基本原理可以應用于所有五種方法,今天我們分享其中兩種方法——氣相色譜柱和高效液相色譜柱。
氣相色譜柱
在氣相色譜中,流動相是氣體。氣相色譜柱的長度通常在1至100米之間。氣相色譜法(GC):液相固定相結(jié)合或吸附到毛細管柱的表面上,或結(jié)合到柱內(nèi)填充的固體載體上。匹配分析物和固定相的極性兩者具有相似的極性,固定相的厚度在0.1到8 µm之間,而厚度越厚,分析物的揮發(fā)性就越大。
高效液相色譜柱
高效液相色譜(HPLC)是液相色譜的一種。液相色譜柱共有三種基本類型:液-液,液-固和離子交換。液-液色譜柱不那么受歡迎,因為它們的穩(wěn)定性有限且不方便。在液-固色譜柱中,固定相為固體,分析物吸收到固定相上,從而分析混合物的成分。通常,HPLC在分析柱之前有一個保護柱,以保護并延長分析柱的使用壽命。保護柱的作用是去除色譜柱上不可逆的顆粒物、污染物和分子等。
常見的HPLC色譜柱由不銹鋼制成,也可以由厚玻璃,聚合物(例如聚醚乙酮),不銹鋼和玻璃的組合或不銹鋼和聚合物的組合制成。采用不銹鋼材質(zhì)的好處有很多,比如不銹鋼相較于玻璃這種材質(zhì),更加的耐腐蝕,耐高壓,耐磨損,使用壽命更長,這樣也能很好的降低使用成本。典型的HPLC分析柱長3至25 cm,直徑1至5 mm。與GC色譜柱不同,這些色譜柱通常是直的。填充柱的顆粒的典型直徑在3至5 µm之間。當色譜柱內(nèi)部堆積的顆粒直徑減小時,液相色譜柱的效率將會提高。
峰或峰展寬會導致色譜柱效率降低。理想的情況將是尖銳的峰被解決。物質(zhì)在色譜柱中停留的時間越長,將導致峰變寬。加長色譜柱是改善色譜柱中不同物質(zhì)分離的一種方法。恒譜生色譜柱高流速,低背壓,可累加柱效,高柱效、分離度佳,平衡時間短,縮短分析時間,節(jié)約溶劑。恒譜生色譜柱管有多種規(guī)格尺寸,比如4.6*50、4.6*100、4.6*150、4.6*250等,0.1μ、0.4μ的光潔度可選。
色譜柱通常需要保持恒溫,以保持效率。塔板高度和理論塔板數(shù)決定了色譜柱的效率。提高效率將是增加板的數(shù)量并減小板的高度。
板數(shù)可以通過以下公式確定:
ñ=大號/ ?(1)(1)N=L/H
其中L是列的長度,H是每個板的高度。
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