溫度的變化會對色譜分析方法的重現(xiàn)性和色譜柱的壽命產(chǎn)生重大影響。但為什么會這樣？恒譜生在以下的內(nèi)容將會為您介紹。

        一、再現(xiàn)性

        隨著溫度的變化，液相色譜柱內(nèi)固定相和流動相之間的熱力學(xué)會受到直接影響。在不同溫度下運(yùn)行方法可能會影響分析物容量因子 (k) 或分析物在色譜柱上的保留時(shí)間。

        在升高的溫度下，流動相和分析物的動能都會增加。分析物動能的增加將導(dǎo)致它們更強(qiáng)烈地移動和振動，并將破壞分子間結(jié)合，即分析物和固定相之間的分離和保留機(jī)制。很多時(shí)候，這會導(dǎo)致所有分析物更快地從液相色譜柱中流出，從而縮短保留時(shí)間。通常，這在溫度跳躍較大時(shí)最為明顯。

        僅幾攝氏度的溫度變化只會影響色譜圖中的少數(shù)特定分析物。小的溫差足以促進(jìn)分析物與固定相或流動相的有利相互作用。在樣品色譜圖中可以看到這種特定的相互作用，因?yàn)榕c其他分析物相比，只有一種分析物的保留時(shí)間發(fā)生了變化，否則它們會保持其保留時(shí)間。由于很難預(yù)測哪些分析物（如果有）會因溫度波動小而表現(xiàn)出保留變化，因此最佳做法是通過打開色譜柱加熱器并將蓋子連接到液相分析柱加熱器上來保持一致的溫度。

        熱力學(xué)通過影響作為溫度函數(shù)的流動相粘度繼續(xù)影響色譜。許多色譜工作者已經(jīng)抓住并利用這種關(guān)系為自己謀取利益。一般來說，隨著流動相粘度的降低，色譜柱上的反壓會直接降低，從而使方法能夠以更高的流速流動，而不會達(dá)到色譜柱或儀器的最大壓力。

        乙腈優(yōu)于甲醇的原因之一是乙腈的粘度較低（0.37 cPoise 與甲醇的 0.60 cPoise 相比）。在反相 LC 中使用甲醇作為有機(jī)溶劑時(shí)，方法的溫度往往為 40 – 60 °C，以通過降低粘度來幫助降低背壓。

        大型生物分析物的展開可能會發(fā)生變化，從而導(dǎo)致它們的 3D 結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。由于許多因素，可能會發(fā)生變性或展開，其中之一是溫度。恒譜生USHB C8色譜柱適合分離大多數(shù)的疏水化合物，如果生物樣品部分展開可能會暴露之前可能已經(jīng)埋在折疊結(jié)構(gòu)中的疏水或親水基團(tuán)，這可能會影響分析物的整體保留時(shí)間。

        二、液相分析柱使用壽命

        溫度也會影響色譜柱的整體壽命。色譜柱的固定相是驅(qū)動其最高溫度規(guī)格的因素。色譜柱的溫度穩(wěn)定性可能因使用的溶劑和緩沖液而異。對于大多數(shù)反相色譜柱而言，60°C 至 90°C 是常見的最高溫度范圍。

        在酸性條件下升高的溫度為與二氧化硅鍵合的配體的水解提供了有利的熱力學(xué)條件。由于失去了為分析物提供保留相互作用的固定相，水解被觀察為保留時(shí)間提前移動。峰之間的分離度損失將比保留時(shí)間的整體偏移發(fā)生得更快。

        與具有相同固定相的新色譜柱相比，通常會看到基線分離度下降或峰合并在一起。最佳做法是在打開柱箱且沒有溶劑流過系統(tǒng)時(shí)不要將色譜柱留在柱箱中。大多數(shù)流動相中都含有一些有機(jī)物，當(dāng)色譜柱儲存不當(dāng)時(shí)，它們會更快地蒸發(fā)掉。